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    4. 学术交流

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      白蝎子七的质量标准
      发布时间:2014/8/11  浏览次数:5296 次  来源:陕西省食品药品监督检验研究院

      白蝎子七的质量标准

      罗定强,黄艳,樊宝娟,杨瑞瑞

      (陕西省食品药品检验所,陕西 西安 710061

        要:目的 建立白蝎子七质量标准。 方法 从植物来源、药材性状、显微鉴别、薄层色谱、紫外光谱组鉴别、绿原酸含量测定进行分析。结果 白蝎子七的性状特征、紫外光谱组鉴别能明显区分其类似品种。结论 该项研究为白蝎子七鉴别、陕西地方药材标准的制定及进一步开发提供科学依据。

      关键词:白蝎子七;质量标准

      ABSTRACT: Objective  To establish the quality sandards of rhizoma of Polygonum macrophyllum. Methods Macroscopic identification, microscopic identification, thin-layer chromatography methods, UV group identification and the content of chlorogenil acid were carried out. Results  Macroscopic identification and UV group identification of the rhizoma  were obvious to different from its analogueConclusion The results provide scientific evidence for the identification,formulation of the Shannxi quality control standards as well as further exploitation of the rhizoma of polygonum macrophyllum.

      KEY WORDS:  Polygonum macrophyllum;  quality sandards

      圆穗蓼(Polygonum macrophyllum D. Don)为蓼科多年生草本植物[1]。在陕西民间又称白蝎子七,是陕西七药之一。具有收敛,止血,止带的功效。主治痢疾,腹泻,风下血,崩漏,白带,吐血,外伤出血[2,3]。作者对白蝎子七从来源、药材性状、显微特征及紫外光谱组鉴别方面进行了系统的生药学研究,并对化学成分绿原酸进行了定性及含量测定。

      1 试药与仪器

      1.1 试药 白蝎子七采自于长安县、眉县、太白县、周至县,经陕西省食品药品检验所郭耀武主任药师鉴定为蓼科圆穗蓼的根茎;绿原酸(中国药品生物制品检定所 批号:110753-200413);甲醇、乙醇及其它试剂均为分析纯,购自西安化学试剂厂。

      1.2 仪器 Sartorius AGME 235S分析天平, Sartorius BS224S分析天平,BX41TF(OLYMPUS)显微镜,日本岛津UV-2550紫外可见分光光度仪,日本岛津LC-10ATVP 高效液相色谱仪。

      2 方法与结果

      2.1 性状鉴别  本品根茎呈扁圆柱形,14cm,直径约0.21cm;表面褐色至黑褐色,环节较明显,有残留的细根或根痕;根茎顶端常有残留的茎痕或叶柄残迹。质硬,不易折断,断面呈灰白色,有时略带浅紫色。气微,味淡、涩。原植物及药材见附图1。

       SHAPE  \* MERGEFORMAT

      1 植物与药材

      2.2 显微鉴别

      根茎横切面(直径0.51.2cm  木栓层细胞36层。皮层较窄。维管束1825个,外韧型,环列。髓部宽广,细胞排列疏松。薄壁细胞中含淀粉粒及草酸钙簇晶。见附图2。

      粉末灰白色。木栓细胞长方形或不规则形,排列不甚规则。草酸钙簇晶多,直径2570μm,棱角大多短钝。淀粉粒多为单粒,圆形或椭圆形,直径约318微米,层纹、脐点均不明显。薄壁细胞多见,类圆形,无色。导管可见,螺纹或网纹,直径825μm。见附图3。

       SHAPE  \* MERGEFORMAT

      1

      2

      3

      4

      5

      6

      7

      1.木栓层;2.内皮层;3.草酸钙簇晶;4.韧皮部;5.导管;6.木纤维;7.髓部

      2  白蝎子七药材横切面详图(×100

       SHAPE  \* MERGEFORMAT

      1.木栓细胞;2.草酸钙簇晶;3.木纤维;4.薄壁细胞;5.淀粉粒;6.导管

      3 白蝎子七根茎粉末图(×100

      2.3 紫外光谱组鉴别

      称取白蝎子七药材粉末0.1g,共三份,分别置于具塞三角瓶中,第一份加入环己烷10ml,振摇10分钟,浸渍过夜,滤过,即得;第二份加入乙酸乙酯30ml,超声处理20分钟,滤过,即得;第三份加入甲醇50mL,超声处理20分钟,滤过,吸取1ml50ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版一部 附录ⅤA),在400200nm波长处,分别测定吸收曲线。见附图4、5、6。

       SHAPE  \* MERGEFORMAT

      5  乙酸乙酯提取UV光谱图

      4  环己烷提取UV光谱图

       SHAPE  \* MERGEFORMAT

      6  甲醇提取UV光谱图

      λmaxcyclohexanenm281;λmaxacetic ethernm250;λmaxmethanolnm281。

      2.4 薄层鉴别

      取本品粉末0.2g,置具塞试管中,加甲醇2ml超声处理10分钟,取上清液作为供试品溶液。取绿原酸对照品,加甲醇制成每1ml0.1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部 附录Ⅵ  B)试验,吸取上述两种溶液各12μl,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以醋酸为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。见附图7。

       SHAPE  \* MERGEFORMAT

      1  2    3    4    5   6   7

      7  薄层色谱图(365nm

      1,2,3,5,6样品;4,7 绿原酸对照品

      2.5 含量测定

      据文献报道[4],圆穗蓼主要化学成分为绿原酸、儿茶素、没食子酸等。绿原酸具有对透明质酸酶及葡萄糖-6-磷酸酶的抑制作用、对自由基的清除及抗脂质过氧化作用以及抗诱变等作用,为白蝎子七的有效成分之一,故以绿原酸为测定指标。

      2.5.1 测定波长的选择 取绿原酸对照品70%甲醇溶液(浓度24.98μg/ml),在400nm200nm进行紫外光谱扫描,在327±2nm有最大吸收,确定以327nm为测定波长。结果见附图8。

      8  绿原酸对照品UV光谱图

      No.  P/V      波长(nm)        吸收值 

         1              328.00           0.705   

      2             264.00      0.157

       

       

       

      3 方法与结果

      3.1 色谱条件 Kromasil C18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈-0.4%磷酸(1387);体积流量:1.0ml/min;检测波长327nm;理论板数以绿原酸峰计算应不低于2000。样品中绿原酸分离情况见附图9。

      9   HPLC

      A.对照品 B.样品 1.绿原酸

      文本框: 图9   HPLC
A.对照品 B.样品 1.绿原酸

       

       

      13 阴性对照、对照品HPLC重叠色谱图

       

      3.2 溶剂的选择 比较不同的提取溶剂乙醇、甲醇、70%甲醇,结果见表1。从表1实验结果,确定70%甲醇为提取溶剂。

      不同溶剂的选择

      称样量(g

      不同溶剂

      峰面积(A)

      峰面积/称样量 (A/ g

      0.2027

      乙醇

      539264

      2660405

      0.2002

      甲醇

      585169

      2922922

      0.2015

      70%甲醇

      618517

      3069563

      3.3 超声时间的选择 取本品(批号:02),研细,取约0.2g,平行2份,精密称定,分别精密加入70%甲醇25ml,称定重量,超声处理(功率250W,频率40kHz20、30、50分钟,放冷,称重,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液用微孔滤膜(0.45μm)滤过,测定,结果见表2。从表2实验结果,确定超声提取时间为30分钟。

      超声时间的选择

      称样量(g

      超声时间(分钟)

      峰面积(A)

      峰面积/称样量 (A/ g

      0.2217

      20

      621952

      2805377

      0.2015

      30

      618517

      3069563

      0.3051

      50

      648481

      3034539

         

      3 样品HPLC色谱图

       

      3.4 对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品适量,加70%甲醇制成每1ml含绿原酸约20μg的溶液。

      3.5 供试品溶液的制备 取本品粉末(过三号筛),约0.2g,精密称定,精密加入70%甲醇25ml,超声处理(功率250W,频率40kHz30分钟,放冷,称重,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,即得。

      3.6 线性关系考察 精密吸取绿原酸对照品溶液(29.5μg/ml2μl,6μl,12μl,16μ、20μl24μl,在上述条件下测定峰面积,以进样量(C)与峰面积(A)作标准曲线, 计算回归方程为A=3.58546×106C,r=0.9999,0.059μg0.708μg范围内线性关系良好。

      3.7 精密度试验 精密吸取对照品溶液10μl,重复进样5次,色谱峰面积积分值分别为1007294,1010883,1013731,1062163,1023698。计算RSD0.53%。结果见图10。

      3.8 重复性试验 取同一批号供试品(批号:020.2g,平行6份,按供试品溶液同法制备,精密吸取10μl,按上述条件测定,平均含量2.1814mg/g,RSD1.94%。结果见表3。

      重复性试验结果

      编号

      取样量/g

      含量/mg·g-1

      平均含量/mg·g-1

      RSD(%)

      1

      0.2068

      2.1795

       

       

      2

      0.2075

      2.1706

       

       

      3

      0.2057

      2.2557

      2.1814

      1.94

      4

      0.2077

      2.1375

       

       

      5

      0.2069

      2.1974

       

       

      6

      0.2073

      2.1479

       

       

      3.9 稳定性试验 取同一样品溶液(批号:02)分别在0,2,4,16,2024h测定,色谱峰面积积分值分别为618517,625105,621951,637069,610905,625838。计算RSD1.39%,表明样品溶液在24小时内测定,稳定性良好。

      3.10 回收率试验 取已知含量重复性试验项下的样品约0.1g(批号:02;含量:2.1814mg/g),平行6份,分别精密加入绿原酸对照品(0.097mg/ml)甲醇溶液2ml,挥干溶剂后,按供试品溶液同法制备,测定含量,平均回收率为96.82%,RSD1.58%。结果见表4。

      回收率试验结果

      批号

      取样量(g)

      样品含量(ug)

      对照品量(ug)

      测得量(ug)

      回收率(%)

      平均回收率(%)

      RSD%

      01

      0.0956

      208.54

      194

      395.48

      96.36

      96.82

      1.58

      02

      0.0867

      189.13

      194

      379.88

      98.32

      03

      0.0978

      213.34

      194

      405.51

      99.06

      04

      0.0935

      203.96

      194

      390.96

      96.39

      5

      0.0801

      174.73

      194

      360.10

      95.55

      6

      0.0887

      193.49

      194

      378.28

      95.25

      3.11 样品测定  精密吸取供试品溶液10μl,注入液相色谱仪,测定,结果见表5。

      样品测定结果

      样品批号

      产地

      含量/mg·g-1

      01

      长安县

      3.5

      02

      长安县

      2.4

      03

      眉县

      2.7

      04

      太白县

      2.1

      05

      周至县

      1.8

      4 讨论

      圆穗蓼在陕西民间又名白蝎子七,通过采集标本、药材,走访民间草医,对药材性状从采集到加工进行观察,发现新鲜药材横断面颜色为浅红色至紫红色;经过晒干后再观察药材的横断面颜色,为灰白色,有时略带浅红色,与民间草医称之为白蝎子七吻合,与文献报道的圆穗蓼的性状横断面颜色描述不同[ 2,3,5]。

      太白蓼为蓼科太白蓼P. taipaishanensis Kung的干燥根茎,在陕西民间又名蝎子七,为白蝎子七药材类似品种,形状与白蝎子七相近。通过采集蝎子七标本、药材,观察其药材性状;发现新鲜蝎子七药材横断面颜色为紫红色,晒干后的药材横断面颜色为棕红色至棕褐色,与文献报道基本一致[6]。经过资源考证,白蝎子七与蝎子七药材横断面颜色可以明显区分,这是白蝎子七药材性状特征不同于其类似品种的主要特点。

      中药材物质基础组成复杂,通常具有多类成分,单一的紫外光谱鉴别不易区分中药材及其来源相近的类似品,采用不同极性的溶剂分别提取药材,利用紫外光谱组鉴别白蝎子七及其类似品种,可以明显区分。类似品种蝎子七药材采用白蝎子七相同的供试品制备方法,进行紫外光谱组鉴别,结果如下:λmaxcyclohexanenm234;λmaxacetic ethernm272;λmaxmethanolnm280。用环己烷、乙酸乙酯提取溶液,白蝎子七与蝎子七药材紫外光谱明显不同;而甲醇提取溶液两者紫外光谱基本一致,在280±2nm均有最大吸收。笔者认为利用紫外光谱组鉴别药材及类似品种便于标准化操作,对于鉴别药材真伪是一种有效的手段。

      薄层鉴别中展开剂使用了70%乙醇、36%乙酸及文献资料中的展开剂[1],结果发现36%乙酸作为展开剂,斑点分离好。另外,利用高效液相色谱法测定了秦岭山区的白蝎子七中绿原酸的含量,平均含量为0.25%,结合文献资料[8,9,10],按平均含量的80%,即0.20%暂定本品含量限度,为该药材地方标准的起草及其开发利用提供资料。

       

       

       

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